檢測過(guo)程(cheng)中的(de)注(zhu)意事項

1、在GB 4789.2的(de)培(pei)養(yang)條件下(xia)所得結果，只包(bao)括一群在平板(ban)計數瓊脂上生長發(fa)育的(de)嗜中溫需氧菌或兼性厭(yan)氧菌的(de)菌落總數。

2、根據(ju)食品衛(wei)生標(biao)準要求和對樣品污染情(qing)況的估(gu)計，選(xuan)擇2~3個稀釋度。加入樣品時要注意外來的污(wu)染。

3、為(wei)防止細(xi)菌增殖及產生片狀菌落(luo)，在加(jia)入樣液(ye)后，應在15min內(nei)傾注培(pei)養(yang)基。檢樣與培(pei)養(yang)基混勻時，可(ke)先(xian)向(xiang)一個方(fang)向(xiang)旋(xuan)轉(zhuan)，然后(hou)再向(xiang)相反方(fang)向(xiang)旋(xuan)轉(zhuan)。旋(xuan)轉(zhuan)中應防止混合物濺到皿邊的(de)上方(fang)。

4、培(pei)養基傾注(zhu)(zhu)的(de)溫度(du)與(yu)厚(hou)度(du)是(shi)實驗正確(que)與(yu)否的(de)關(guan)鍵。（傾注(zhu)(zhu)的(de)溫度(du)：一般(ban)水浴和傾注(zhu)(zhu)溫度(du)在(zai)46±1℃，溫(wen)度過高會造成已受(shou)損傷的菌細(xi)胞死亡，過低會導致瓊脂發生(sheng)輕微凝固(gu)。厚度：直徑9cm的平皿一般要求(qiu)15~20mL培(pei)養(yang)基(ji)(ji)，若培(pei)養(yang)基(ji)(ji)太薄，在培(pei)養(yang)過程(cheng)中(zhong)可能因水分蒸發(fa)而影(ying)響(xiang)細菌的(de)生長）。培(pei)養(yang)基(ji)(ji)凝固(gu)后(hou)，應(ying)在盡快將(jiang)平皿翻轉培(pei)養(yang)，保(bao)持瓊(qiong)脂表面(mian)干燥(zao)，盡量(liang)避免(mian)菌落蔓(man)延生長，影(ying)響(xiang)計數(shu)。

5、檢(jian)驗(yan)過程中還(huan)應(ying)該(gai)用稀釋液做空(kong)白對照，用以(yi)判定稀釋液、培養基、平(ping)皿或(huo)吸(xi)管可能存在的(de)污(wu)染(ran)。同(tong)時，檢(jian)驗(yan)過程中應(ying)在工作(zuo)臺上打開(kai)一塊空(kong)白的(de)平(ping)板計數瓊脂(zhi)，其暴露時間應(ying)與檢(jian)驗(yan)時間相當(dang)，以(yi)了解(jie)檢(jian)樣(yang)在檢(jian)驗(yan)過程中有無(wu)受到來自空(kong)氣的(de)污(wu)染(ran)。

6、每種(zhong)不同(tong)樣品中的(de)(de)(de)細菌都(dou)有一定的(de)(de)(de)生理(li)特(te)性，培(pei)(pei)養時(shi)應用不同(tong)的(de)(de)(de)營養條(tiao)件(jian)(jian)及生理(li)條(tiao)件(jian)(jian)可能得出(chu)不同(tong)的(de)(de)(de)結(jie)果，因(yin)而應根據檢測標準(zhun)的(de)(de)(de)要求選擇適當(dang)的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養溫度和培(pei)(pei)養時(shi)間(jian)。

食(shi)品：36±１℃，48±2h 。

飲用水：36±１℃，48±2h 。

水產品（指原生態、未加工的水產品）：30±１℃，72±3h。(36℃培養和30℃培養(yang)結(jie)果差別較大，同(tong)樣水(shui)產品(pin)48h結果和72h也有差別。

7、有時檢樣(yang)的稀釋液中往往帶有食(shi)品顆(ke)粒（如奶粉、堅果），在這種情況下，為避免(mian)與細菌菌落(luo)混淆(xiao)，可作(zuo)一檢樣(yang)對照將(jiang)稀釋液與PCA混合，不經(jing)培養，置(zhi)4℃環境放置，在計數時用于(yu)對(dui)照。

另外也可以(yi)在(zai)已熔化而保(bao)溫在(zai)46±1℃水浴內的平板計數瓊脂中，按100ml加(jia)1ml 0.5%氯化三(san)苯四氮唑（TTC）水溶液，培養(yang)后食(shi)品顆粒(li)不變(bian)色，細(xi)菌為紅(hong)色。

菌(jun)落計數注意事項(xiang)

1、如果高稀釋度平板(ban)上(shang)的菌(jun)落(luo)數(shu)比(bi)低稀釋度平板(ban)上(shang)的菌(jun)落(luo)數(shu)高，則(ze)說明檢驗過程(cheng)中(zhong)可(ke)能出現差錯或(huo)樣(yang)(yang)品中(zhong)含抑菌(jun)物質，這樣(yang)(yang)的結(jie)果不(bu)可(ke)用于結(jie)果報告。

2、如果平板上出現(xian)鏈(lian)狀(zhuang)菌(jun)落(luo)，菌(jun)落(luo)間沒有(you)明顯的(de)界限，這可能是瓊(qiong)脂與檢樣混勻時，一個(ge)(ge)細(xi)菌(jun)塊被分散所造(zao)成(cheng)的(de)。一條(tiao)鏈(lian)作為一個(ge)(ge)菌(jun)落(luo)計。若(ruo)培養過程中遭遇昆(kun)蟲侵入，在(zai)昆(kun)蟲爬行過的(de)地(di)方也會出現(xian)鏈(lian)狀(zhuang)菌(jun)落(luo)，也不應分開計數。

3、如果平板上菌落太多(duo)(duo)，不(bu)能計數時，不(bu)建議(yi)采用多(duo)(duo)不(bu)可(ke)計作(zuo)報告。可(ke)以在最高(gao)稀(xi)釋(shi)度平板上任意選取2個(ge)1cm2的面積，計(ji)算菌落數，除(chu)2求出每cm2面(mian)積內平均菌(jun)落數，乘(cheng)以63.6(皿底面積cm2數)。

4、如果(guo)檢樣是微生(sheng)物類(lei)制劑（酸牛(niu)奶、酵(jiao)母(mu)制酸性(xing)飲料等），在(zai)進(jin)行(xing)菌(jun)(jun)落(luo)計數時應將有關微生(sheng)物（乳酸菌(jun)(jun)、酵(jiao)母(mu)菌(jun)(jun)）排除，不可并入檢樣的菌(jun)(jun)落(luo)總數內作報告(gao)。 每個樣品(pin)從(cong)開始稀釋(shi)到(dao)傾注最后一個平板的時間不得超過15min,目(mu)的是為了使菌落能(neng)在(zai)平(ping)板上均勻(yun)分布(bu)，否則，時(shi)間放(fang)長了，樣(yang)液可(ke)能(neng)由于干燥而貼在(zai)平(ping)板上，傾(qing)注瓊脂后不易搖開，容易產生(sheng)片(pian)狀菌落，影(ying)響菌落計(ji)數。另外，瓊脂凝固后不要(yao)在(zai)室溫長時(shi)間放(fang)置，應及時(shi)將平(ping)皿倒置培養，可(ke)避免菌落的蔓(man)延生(sheng)長。

結果計算注意(yi)事項

1、若只有一(yi)個稀(xi)釋(shi)度(du)平板上的(de)菌落數(shu)在(zai)適宜(yi)計(ji)數(shu)范圍內(nei),計算兩(liang)個平板(ban)菌落數的(de)平均值,再將平均值乘(cheng)以相(xiang)應稀釋倍數,作為(wei)每(mei)g(mL)樣(yang)品中(zhong)菌落總數結果(guo)。

2、若有兩個連續稀釋度的平板菌(jun)落數在適(shi)宜技術范圍內時，按式（1）計算

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d ……………………(1)式中:

N ———樣(yang)品中菌(jun)落數;

∑C———平(ping)板(含適宜范圍菌落(luo)數的平板)菌(jun)落數之(zhi)和;

n1 ———第一稀(xi)釋度(低稀釋倍數(shu))平(ping)板(ban)個數;

n2 ———第二稀釋度(高稀釋(shi)倍(bei)數)平板個數;

d ———稀釋因子(第一稀(xi)釋度(du))。

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d ;= (232+244+33+35)/[2+ (0.1×2)]×10-2 = 544/0.022=24727

表(biao)示為25000或2.5×104。

3、若(ruo)所有稀釋度的平板上(shang)菌(jun)落數均大(da)于300CFU,則對稀(xi)釋(shi)度最高的平(ping)板進行計數,其他平板可(ke)記錄為多不可(ke)計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

4、若所有(you)稀釋度的平(ping)板(ban)菌落數(shu)均小于30CFU,則應按稀釋度最(zui)低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算(suan)。

5、若所有稀釋(shi)度(du)(包括液(ye)體樣品原液(ye))平板(ban)均(jun)無(wu)菌落生長(chang),則(ze)以小于1乘以最(zui)低稀釋倍數(shu)計算。

6、若所(suo)有稀釋(shi)度的(de)平板菌落數均不(bu)在30CFU~300CFU 之間,其(qi)中一(yi)部分(fen)小于(yu)30CFU 或大(da)于(yu)300CFU 時,則(ze)以最接近30CFU 或300CFU 的(de)平均菌落(luo)數(shu)(shu)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)(shu)計算(suan)。

菌(jun)落總(zong)數的報告

1、菌落(luo)數小于100CFU 時,按“四舍五入”原則修約,以整數報告。

2、菌落數(shu)大于或等于100CFU 時,第3位數字采用“四舍五(wu)入”原則修約后,取前2位數字,后面用0代替位數;也(ye)可用10的指數形式來表(biao)示,按“四(si)舍(she)五入”原則修約后(hou),采用兩位有效數字。

3、若所有平板(ban)上(shang)為蔓延菌落而無法計(ji)數,則報(bao)告(gao)菌落蔓延。

4、若空(kong)白對照(zhao)上有菌落生長(chang),則此次檢測結果無效。

5、稱(cheng)重(zhong)取樣(yang)以CFU/g為單(dan)位報告,體積取樣以CFU/mL為單位報告(gao)。