培養基的滅菌(jun)及使用
1.每次配置時，要(yao)注(zhu)意其(qi)(qi)生(sheng)產日期是(shi)否在保質(zhi)期內，查看(kan)其(qi)(qi)開瓶(ping)日期及瓶(ping)口(kou)密封性，保證其(qi)(qi)未變質(zhi)，并且未吸潮(chao)。
2.培養基配置時，稱量(liang)要準(zhun)確(que)，包括鹽水的分裝要準(zhun)確(que)。
3.一定(ding)要保(bao)證現配(pei)制(zhi)現滅(mie)菌，未滅(mie)菌的配(pei)好培(pei)養基(ji)不(bu)能長(chang)時間放(fang)置(zhi)，更不(bu)可隔夜。
4.滅(mie)菌時要保(bao)證恒溫、恒壓，同時要保(bao)證有(you)效滅(mie)菌時間。
5.滅菌過的培養基要(yao)(yao)冰箱保(bao)存，可保(bao)存一周，一般不超過 3 天。而(er)且要(yao)(yao)遵(zun)循“先(xian)入先(xian)出”原則，先(xian)配制的要(yao)(yao)先(xian)使用。
6.在使(shi)用(yong)時(shi)，要根據當班(ban)次的使(shi)用(yong)量，用(yong)水(shui)浴鍋(guo)(guo)先將培養基(ji)溶化為液態(tai)，然后(hou)及時(shi)調低(di)水(shui)域溫度(du)（先化好的可從水(shui)域取出，放在水(shui)浴鍋(guo)(guo)鍋(guo)(guo)蓋上）待(dai)用(yong)，千萬(wan)不可長時(shi)間使(shi)培養基(ji)處于(yu)高(gao)溫狀態(tai)。
7.做產品(pin)微(wei)生物檢(jian)測(ce)時，傾倒培養(yang)基溫(wen)度在(zai) 45℃左(zuo)右，不可過燙，避免將菌燙死(si)；也不可過涼(liang)，化好(hao)的培養(yang)基又結塊凝固，不便(bian)于觀察結果。
8.每瓶培養基均要做空白。
9.盡量(liang)集中(zhong)做樣，避免(mian)頻繁(fan)打開同一瓶(ping)培養基瓶(ping)塞，增大培養基的污(wu)染幾率(lv)，出現誤差(cha)結果(guo)。
10.培(pei)養基剩余過少時，可先將其(qi)傾(qing)倒成(cheng)空白用板(ban)。
做樣環(huan)境的維持
一、大環境（房(fang)間）
1.做樣時，窗戶和空調(diao)要(yao)關閉，或用酒(jiu)精(jing)對(dui)房間(jian)進行(xing)噴霧消毒，避免房間(jian)內空氣流通(tong)影響超凈臺內部環(huan)境（最好在有通(tong)排風系(xi)統的恒溫恒濕(shi)無菌間(jian)進行(xing)操作）。
2.如果在原(yuan)來的原(yuan)料微(wei)生(sheng)物檢(jian)測室(shi)進(jin)(jin)行做樣，要定期開(kai)啟紫外燈(deng)，對(dui)房間進(jin)(jin)行殺菌(jun)。
二、小環境(jing)（超凈臺）
1.定(ding)期清潔初效過濾器，要(yao)及時更換。
2.做樣前，將超(chao)(chao)凈臺內部進(jin)(jin)行(xing)清潔，用 75%酒精進(jin)(jin)行(xing)擦(ca)拭消毒，并提前半小時將超(chao)(chao)凈臺紫(zi)外燈打開，對超(chao)(chao)凈臺內部環境進(jin)(jin)行(xing)殺菌。
3.關紫外燈，開風機，調整合(he)適(shi)進風量，風量不可過(guo)低。
4.每次(ci)做樣后，要對(dui)超凈臺內部進行清(qing)理、清(qing)潔，并用 75%酒精進行擦拭消毒。
5.紫外燈根據(ju)其使(shi)用(yong)壽命要及時更換。
6.做樣同時，要做上相應菌落檢測的環境空白(bai)。
7.做樣區域的選擇：
①一般在距離超凈臺外沿(yan)的 1/3-2/3 區域進(jin)行無菌操作；
②要(yao)在酒(jiu)精燈火焰的(de)外焰保護區域進行操作。
工器具的潔凈度
1.玻璃器皿(min)：采用干(gan)熱滅菌(jun)方式進行滅菌(jun)。
2.做樣用剪刀、勺子(zi)等(deng)物品要(yao)做到做樣專(zhuan)用，不可與(yu)其(qi)它操作器(qi)具混用，使用時(shi)，先用75%酒精消毒，再采用灼燒(shao)方(fang)式進行滅菌。
3.接種針(zhen)（環(huan)）采用(yong)灼燒方式進(jin)行(xing)(xing)滅菌，但要注意做樣(yang)時要先將接種針(zhen)（環(huan)）進(jin)行(xing)(xing)冷(leng)卻。
樣品的采(cai)集及檢測
一、保證(zheng)采樣(yang)器(qi)具的無菌性
1.玻(bo)璃(li)器皿(min)(min)：采(cai)用(yong)干熱(re)滅菌方式進行滅菌，保證恒(heng)溫、時(shi)間(jian)足(zu)夠(gou)（但不可時(shi)間(jian)過長，導致(zhi)玻(bo)璃(li)器皿(min)(min)易裂紋而(er)報廢）。
2.取樣(yang)筐：使(shi)用(yong)前要用(yong) 75%酒精進行噴灑消毒
3.取(qu)(qu)樣勺、濃奶(nai)取(qu)(qu)樣提(ti)子：要(yao)保證其清潔消毒(du)，清潔后(hou)用 75%酒精進行擦拭(shi)消毒(du)。
4.取樣袋：可現用(yong)酒精進(jin)行擦(ca)拭消(xiao)毒(du)，再在(zai)超凈臺用(yong)紫外燈照(zhao)射消(xiao)毒(du)，（包裝(zhuang)車(che)間要在(zai)傳(chuan)遞窗用(yong)紫外燈照(zhao)射消(xiao)毒(du)）。
5.電子稱表面用 75%酒精消毒(du)。
二、人員操作
1.保證手部的清洗、消(xiao)毒：取樣前及做(zuo)樣前都要先洗手再消(xiao)毒。
2.取樣要(yao)具有代表性（隨機樣、目(mu)的樣、綜合(he)樣）且(qie)要(yao)標示(shi)清楚。
3.取樣完畢(bi)，不可(ke)在車間逗留，要及(ji)時將樣品放入超凈臺，對(dui)其(qi)外表面進行紫外燈照射消毒(du)。
4.在要求的做(zuo)樣(yang)區域進行操作(zuo)。
5.做(zuo)樣(yang)前，要用 75%酒精棉(mian)球對樣(yang)品袋(dai)口部進行擦(ca)拭消毒，再開(kai)口。
6.往鹽水瓶(ping)(ping)加樣品(pin)時，要(yao)注意勺子(zi)或袋(dai)子(zi)盡(jin)量(liang)不接觸瓶(ping)(ping)口。
7.樣品(pin)計量要(yao)準(zhun)確，稀釋倍數也要(yao)準(zhun)確（1mL 吸管(guan)(guan)(guan)不允許(xu)將管(guan)(guan)(guan)口敲掉），進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管(guan)(guan)(guan)要(yao)伸(shen)入鹽水中，不可以將樣品(pin)管(guan)(guan)(guan)壁流(liu)下去，同時要(yao)避免(mian)將管(guan)(guan)(guan)底部捅破。
8.鹽水(shui)溫度以 40℃左右為(wei)宜，不能(neng)(neng)過(guo)熱，將部分微生物(wu)燙死，也不能(neng)(neng)溫度太低，不能(neng)(neng)將奶粉溶解(jie)完全。
9.進(jin)行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。
10.傾倒平皿時，要(yao)注意培(pei)(pei)養基瓶口不要(yao)接觸(chu)到平皿；傾倒的培(pei)(pei)養基要(yao)適量(liang)，不可(ke)以(yi)(yi)太少，在培(pei)(pei)養過程中干掉，微(wei)生物亦死亡，以(yi)(yi) 15mL 左右為宜。
11.做大腸菌(jun)群樣時，要(yao)提前將乳糖膽(dan)鹽培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)管按(an)需(xu)要(yao)量備(bei)好，放(fang)入超凈臺(tai)對外表面進行紫外線(xian)滅菌(jun)。
12.接(jie)二(er)步時，要注意先將(jiang)接(jie)種針（環(huan)）進行(xing)冷卻，避免出(chu)現(xian)接(jie)不上菌落的情況(kuang)發生(sheng)，導(dao)致無法判(pan)斷、確(que)認。
13.做樣完畢(bi)，及(ji)時放入相(xiang)應(ying)培養箱進行培養，并清(qing)理清(qing)潔超(chao)凈臺。
微生物的培(pei)養
1.在培養過(guo)程中，要隨時(shi)監控(kong)培養箱溫(wen)度，保證(zheng)其(qi)在適宜的溫(wen)度進行培養。
2.要按照《微生物(wu)檢驗(yan)規范(fan)》要求及時觀察結果，出(chu)現異常，要及時分析原因(yin)進行(xing)反饋。
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